Mikołaj V do Sykstusa V
Początki współczesnej historii Biblioteki Watykańskiej sięgają połowy XIV wieku. Mikołaj V był tym, który zdecydował, że uczeni powinni być w stanie czytać i studiować teksty łacińskie, greckie i hebrajskie. Wraz z mianowaniem bibliotekarza, Bartolomeo Platiny, i wymaganą pomocą finansową, Sykstus IV wznowił, sfinalizował i przeprowadził misję Mikołaja V. Nowa instytucja mieściła się na parterze budynku, który Mikołaj V już wcześniej poddał renowacji. Z łącznej liczby 2 527 manuskryptów w 1475 roku do łącznej liczby 3 498 w 1481 roku, kolekcja wciąż rosła.